一、為什麼要做免疫組織化學染色?

研究從細胞實驗In vivo到動物實驗In vitro。藥物毒殺、細胞凋亡、癌症發生機制、 細胞傳遞pathway、Knockdown、MicroRNA…等等，為了驗證實驗正確。

免疫組織染色已經是研究趨勢

二、組織處理-石蠟包埋之步驟

三、石蠟切片

  以石蠟製作的切片，可以製成極薄的切片,一般的切片厚度要求在3-5微米,而石蠟切片不但可以達到這個要求，甚至可以切得更薄到2微米以至1微米,這一點是冰凍切片難以獲得的結果。 另外，石蠟切片還便於製作大批的或是連續的切片,而且以石蠟包埋的組織塊便於長期保存,所以石蠟切片是目前各種切片製作方法中最普通常用的一種方法。

四、免疫組化染色步驟IHC Potocol

1. 烤片 65℃，60 分鐘或 37℃，overnight

2. 脫蠟, Xylene X 2, 各 10 分鐘。(或 Xylene X3,各 8分鐘)

3. 覆水, 99.9(100) % x 2、95 % X1、85% X1、75% X1 各四分鐘。

4. De-peroxidase reagent,室溫 20 分鐘。

5. HIER or Enzyme 前處理。PBS Wash, 2分鐘三次。

6.Immunoblock ,37°C,60分鐘(blocking non-specific binding)

7. Primary Antibody 60 分鐘。(請依實驗室使用抗體時間調整)

8. PolyDetector, 30 分鐘。

9. DAB brown, 5~10 分鐘(30ul DAB + 1ml DAB buffer )※配合顯微鏡下觀察

10. Hematoxylin,20~60 秒。(抗體染在核上時,可縮短時間到 10~20 秒)

11. Running water Wash, 5 分鐘。

12. 脫水,100%酒精後烘乾或風乾再進入 Xylene 或取代劑中。

13. 封片(若使用 Xylene 取代劑時須注意封片膠與取代劑是否可互溶)。

(歡迎諮詢討論實驗)

五、BioTnA免疫組化試劑盒IHC Kit

1. Detection systems:小鼠、兔子、小鼠與兔子廣用型。
2. 有效解決非特異性造成的背景。
3. 簡易操作。
4. 價格優勢。
5. 避免Mouse抗體作用在Mouse上的干擾。不挑抗體。

六、BioTnA雙染免疫組化試劑組IHC Double stain kit

1. 不需要特殊昂貴的螢光顯微鏡設備。
2. 可見光顯微鏡即可觀察。
3. 結果可長期保存。
4. 採DAB/HRP Green呈現，對比強烈。
5. 經濟實惠，操作簡單。
6. 避免兩支同來源一抗的干擾，不挑抗體。(另外也有IFA不挑抗體的解決方法)

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