免疫組織化學染色原理與步驟 - 拓生科技有限公司

Immunohistochemistry staining Kit , IHC ( for Protein )免疫病理化學染色 ( 針對蛋白質 )

一、原理介紹

　Immunohistochemistry , IHC為具有專一性之呈色，藉由組織上蛋白質的抗原表位Epitope與抗體Antibody進行非共價鍵結合Non-covalent bonding (ex:凡德瓦爾利Van der Waals forces、氫鍵hydrogen bonds、靜電作用electrostatic interactions)，以偵測組織或細胞內目標蛋白質的表現量及位置。

(一)、固定與切片 Fixation & Section組織切片前多以10% 福馬林固定Formalin fixation維持蛋白質型態，切片後會貼於有poly-L-lysine塗層之玻片上烤片，使組織固定在玻片上。

(二)、過氧化氫處理 Hydrogen peroxide組織內含有超氧化物歧酶Superoxide Dismutase ,SOD，尤其腦、肝、血液等含量特別高，因此若使用可見光呈色劑Chromogen作呈色時(DAB、AEC、HRP Green)，需經過3% H2O2處理，使SOD破壞，減少Polymer HRP呈色的背景Background。

(三)、抗原修復 Retrieval福馬林固定石蠟包埋Formalin Fixation Paraffin Embedded ,FFPE中，由於甲醛的化學特性，能使不帶電荷的氨基酸間以亞甲基橋Methylene bridge(-CH2-)的方式形成交聯Cross-links。(Lys, Tyr, Trp, Cys, His, Arg, Asn, Gln)但Cross-links會導致肽Peptides及Epitopes的抗原性Antigenicity降低，因此透過抗原修復Retrieval來回復與Antibody bidding的能力。

(四)、阻斷劑 Blocking組織切片經過適當的Retrieval後，為了減少抗體對於組織的非專一性結合non-specific bidding產生，會使用BioTnA特別對於IHC優化的非血清性Non-rerum Immunoblocking reagent，可有效降低背景Background的產生。

(五)、抗體結合與沉澱 Antibody bidding & Precipitate組織切片經過適當的Retrieval後，使Methylene bridge打斷，便可使一級抗體Primary antibody與Epitope達到良好的bidding，主要利用抗體上的抗原結合區段Fragment antigen binding ,Fab可以有效的辨識Antigen上的Epitope進行專一性結合。隨後以二級抗體Secondary antibody(Polymer HRP)來連接Primary antibody的抗原結晶區Fragment crystallizable region ,Fc端，因具有辣根過氧化物酶Horseradish Peroxidase，可使Chromogen氧化後沉澱Precipitate，將被bidding的Epitopes呈陽性反應Positive。

二、染色目標與應用:

由於IHC涉及特異性抗原-抗體反應，與僅能以有限的蛋白質、酵素和組織結構進行識別的傳統特殊酶染色技術相比，IHC具有明顯的優勢。因此IHC已成為一項至關重要的技術，並已在許多醫學研究實驗室以及臨床診斷中廣泛使用，如癌症的預後標記Prognostic Markers in Cancer、組織內未知腫瘤Tumors of Uncertain Histogenesis、發育與凋亡Development and Apoptosis、神經性退化疾病Neurodegenerative Disorders、腦外傷Brain Trauma、肌肉中疾病Muscle Diseases 等etc，IHC可見光染色可分為單色染色Single stain、雙色染色Double stain、三色染色Triple stain 三種染色方法，其染色原理均相似，主要取決為預觀察之目標及期望的表現形式，透過Antibodybidding的位置以及使用的Chromogen來呈現其結果，下列表格將簡單整理BioTnA各式染色之Kit組、bidding的位置以及使用的Chromogen來呈現其結果，

下列表格將簡單整理BioTnA各式染色之Kit組。