免疫組化的傳統技術正在受到新的快速高敏的新技術的挑戰,一方面是新試劑的推出,如SP、EPOS、Envision,另一方面是自動免疫組化染色機的問世。免疫組化技術正進入一個新的發展階段。從先進國家免疫組化規範化或標準化的進程來看,自動免疫組化染色機的應用幾乎貫穿始終,早在20世紀末已得到極大的普及,然而國內的自動免疫組化染色機應用則在近幾年才得以發展。在自動化免疫組化染色的使用和質量控制方面獲得些許經驗,在此做簡單的介紹交流。
自動化免疫組化染色技術是由電腦控制整個染色程序的免疫組化染色機,具有自動加抗體、自動沖洗、顯色、復染、雙標記染色染及預處理等功能,有全自動和半自動、封閉型和半開放型之分。根據不同儀器大小,每次染色20~240張切片不等,整個染色程序約需60~90min左右,它不僅可以應用於免疫組化染色,某些儀器還可應用於組織化學染色、特殊染色及原位分子雜交染色。目前較為常用的儀器為Roche公司、Lecia公司及Thermo公司的產品等。近年來BioTnA也從試劑市場跨足儀器市場。
下面針對BioTnA公司的自動染色機特點做說明:
1.可一台電腦控制五台染色機
2.可單染雙染流程
3.可連續上機
4.可選擇上機液體體積
該機型屬半開放式全自動系統類型,僅針對一抗完全開放,用戶可以根據個人的偏好使用任何品牌的一抗。獨有的檢測系統內包含Compact Polymer技術(緊湊型聚合物)相比傳統方法而言,信號放大作用、穿透力能力更強。該檢測系統類似於增強型的Polymer技術(與Leica機型類似),可以使陽性顯色密度更高,背景更清晰。特別的一項技術在玻片表面增加一個塑料罩,為免疫反應提供一個封閉的孵育環境,防止試劑揮發,既確保樣品的安全也進一步節省抗體的實用。此技術會輕輕將液滴鋪散到玻片的規定區域,確保試劑均勻分佈到組織的表面,既可防止組織的損傷,又使抗體的作用更均勻,染色結果更可靠。尤其是獨特的溫控技術可實現每張切片獨立溫控,提供最佳的反應動力學環境。免疫組化的所有步驟從烤片、脫蠟、抗原修復、阻斷、標記一炕、標記二抗、顯色、復染、直到雙標記染色染都可以由BioTnA的機型自動完成,真正實現全自動操作。再搭配BioTnA公司的免疫組化試劑,不但能跨越同物種抗體雙標記染色染的障礙,更能直接解決背景問題,該平台能優化組合兩者的優點,有利於最大限度降低偽陽性或偽陰性以提高診斷質量。
現在市場需求常以兩個一抗做染色,但是傳統市場上的機型,在處理雙染(Double stain),效果並沒有比做兩片單一抗體來的好,因此BioTnA公司針對雙標記染色染及組織(ex:brain、liver、skin…等)背景處理,研發、改良免疫組織化學染色試劑套組,改善了偽陽性、非特異性抗原干擾的問題。雙染標記染色主要是以DAB及HRP Green做搭配,對比較為明顯。
圖為BioTnA自動染色機實做雙染data:
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