PAS染色，一種常用於檢測組織中「醣類」的染色方法，染色先使用過碘酸(periodic acid)將組織中醣類相鄰兩個碳原子的羥基(-OH)氧化成醛基(-CHO)，後再與許夫試劑(Schiff solution)反應，醣類就會被染成粉紅至桃紅色。
PAS染色主要用於標示組織中的醣類或醣蛋白，於腎臟常用於觀察基底膜(basement membrane)。在有慢性腎損傷，數常見如糖尿病時，常可見基底膜的增厚，於絲球體及鮑氏囊腔即可見大量PAS陽性組織表現。
這個染色常用觀察組織中的黏液(mucin)、醣原(glycogen)、軟骨(cartilage)、基底膜(basement membrane)等。病原檢查上則最常用於檢驗組織中的「黴菌」，應用非常廣泛。
一、染色原理介紹:
Bio TnA Periodic Acid-Schiff , PAS染色，主要分成兩個原理進行解釋。
►過碘酸試劑Periodic Acid reagent :
Periodic acid將醣類的一號碳與二號碳切割(鄰二醇結構vicinal diol structure)，使一、二號碳上的氧原子與一、二號碳形成雙鍵形成羰基。(Fig.1) (Malaprade reaction)
►席夫試劑Schiff’s reagent :
無色的Schiff’s reagent與含羰基化合共價鍵結合後以形成紫紅色產物的染色液，而其呈色原理為副玫瑰紅素Pararosaniline與亞硫酸Sulfurous acid處理，形成Schiff’s reagent(Pararosaniline leucosulfonic acid)。
Schiff’s reagent的製作是通過在中心碳上添加磺酸基團而導致呈色基團Chromophore(Quinoid ring)的破壞，使其變為無色化合物，通過羰基的共價結合將其呈色基團Chromophore上的喹啉環Quinoid ring結構還原，使結合的醣類呈色為紅色
Fig.1 Periodic acid (HIO4) reagents used for vicinal diol structure cleavage ,with breakage of the carbon–carbon bond and formation of carbonyl groups. (Malaprade reaction)
圖一、過碘酸(HIO4)試劑用於裂解鄰二醇結構，使醣類的碳－碳共價鍵斷裂並形成羰基。
(此圖由拓生科技此圖由拓生科技繪製，僅供參考用。)
Fig.2 Loss of the quinoid ring of Pararosaniline in the left diagram (highlighted in red) by the change from double to single bonds (highlighted in blue) because of the addition of – H2SO3 and the formation of Schiff’s reagent.圖二、左圖副玫瑰紅素的喹啉環（紅色）由於添加了H2SO3後受損，從雙鍵到單鍵(藍色)之變化，形成了Schiff’s試劑。
(此圖由拓生科技繪製，僅作為參考用)
in the rightmost diagram.圖三、左圖單鍵Schiff’s試劑(藍色)由於添加了醛，因此還原了副玫瑰紅素的喹啉環(紅色)。(此圖由拓生科技繪製，僅作為參考用)
二、染色目標:
►黏蛋白Mucin－消化腺peptic gland、腸道intestinal tract、結膜conjunctiva、支氣管腺bronchial glands 等etc.
►基底膜Basement membranes、軟骨Cartilage、腦苷Cerebrosides、腎小管Kidney tubules、腎透明圓柱體Renal hyaline casts 等etc.
►肝醣Glycogen、澱粉Starch等etc.
►真菌(細胞壁Cell wall-幾丁質Chitin)Fungal Organisms
三、染色應用:
Periodic Acid-Schiff 可以應用於檢查組織真菌性感染Mycoses、腎小管Kidney tubules、薄基底膜疾病Thin basement membrane disease, TBMD、膀胱Bladder、腎臟Kidney、胰臟Pancreas、卵巢Ovary及肺腫瘤Lung tumor等etc.產生之肝醣Glycogen累積。
四、呈色結果:
►藍色(Hematoxylin )－細胞核Nucleus
►紫紅色(Schiff’s reagent)－黏蛋白Mucin、肝醣Glycogen、真菌Fungal 等etc.
►綠色(Light green)－其他組織 Other tissue
五、BioTnA Periodic Acid-Schiff stain TASS02 實際染色參考:
六、BioTnA Periodic Acid-Schiff staining Kit , PAS stain Kit TASS02染色步驟 Protocol
1.烤片 65℃，60分鐘或37℃，overnight。
2.脫蠟，Xylene*2，各10分鐘。(或Xylene*3，各7分鐘)
3.覆水，99.9(100)%*2，95%*1，85%*1，75*1，各2分鐘。
4.自來水沖洗約5分鐘(避免直沖組織)，隨後以蒸餾水沖洗。
5.加入Periodic acid 覆蓋過組織，5分鐘。
6.以蒸餾水沖洗。
7.加入Schiff reagent 覆蓋過組織，15分鐘
8.自來水沖洗3分鐘(避免直沖組織)。
9. Counterstain Hematoxylin 5~10秒(依需求可自行調整染色時間)
10.自來水沖洗15分鐘(避免直沖組織)，轉色。
11. Light green 染色2分鐘。(選用optional)
12.以蒸餾水快速清洗。(選用optional)
13.玻片以風冷晾乾
14. Xylene膠封片(尚未封片前，須先置入xylene中。若使用Xylene取代劑時須注意封片膠與取代劑是否可互溶)。
※備註：若有染選用optional的項目，請勿以酒精脫水，會把染好的顏色洗掉。