H&E STAIN(H&E染色)

1.烤片 65℃,60分鐘或37℃,overnight。
2.脫蠟,Xylene*2,各10分鐘。(或Xylene*3,各7分鐘)
3.覆水,99.9(100)%*2,95%*1,85%*1,75*1,各2分鐘。
4.自來水浸泡約5分鐘。
5.Hematoxylin染色1分鐘。
6.自來水沖約五分沖洗(避免直沖組織),轉色。
7.Eosin染色約5分鐘。
8.過100%酒精2次,風乾。
9.Xylene*2,各2分鐘。(此步驟可省略,玻片晾乾後,尚未封片前,須先置入xylene中。)
10.Xylene膠封片(若使用Xylene取代劑時須注意封片膠與取代劑是否可互溶)。

描述

H&E 蘇木紫-伊紅染色
HE stain 是組織染色嘴常使用的染色方法之一,這種染色方法的基礎是組織結構對不同染料的結合程度不同。可以將嗜鹼性結構染成藍紫色,鹼性結構通常包括含有核酸的部分,如核糖體、細胞核及細胞質中富含核糖核酸(RNA)的區域等,而伊紅可以將嗜酸性結構染成粉紅色
優點:
1、組織及細胞結構清晰,為最廣泛應用於組織切片形態觀察的染色法
缺點:
1、部份形態相近細胞難以區別
2. 僅用於形態觀察,無法分辦組織細胞不同的生化特性

H&E 染色原理:

蘇木素是鹼性染料,藍紫色,可以使細胞核等著色。被蘇木素著色的結構本身為酸性,具有嗜鹼性(Basophilic),伊紅是酸性染料,粉紅色。可以將大多數細胞的細胞質染成紅色。被伊紅著色的結構本身為鹼性,具有嗜酸性(Acidophilic)。不易被蘇木素和伊紅著色的結構具有嗜中性(Neutrophilic)。

H&E染色步驟(protocol)
1.烤片 65℃,60分鐘或37℃,overnight。
2.脫蠟,Xylene*2,各10分鐘。(或Xylene*3,各7分鐘)
3.覆水,99.9(100)%*2,95%*1,85%*1,75*1,各2分鐘。
4.自來水浸泡約5分鐘。
5.Hematoxylin染色1分鐘。
6.自來水沖約五分沖洗(避免直沖組織),轉色。
7.Eosin染色約5分鐘。
8.過100%酒精2次,風乾。
9.Xylene*2,各2分鐘。(此步驟可省略,玻片晾乾後,尚未封片前,須先置入xylene中。)
10.Xylene膠封片(若使用Xylene取代劑時須注意封片膠與取代劑是否可互溶)。
※備註:Hematoxylin&Eosin染色時間,取決各實驗室顏色喜好而定。

實際染色參考:

上圖,除了大量的膠原纖維產生外,還可見有大量多角形的細胞,這些細胞不會出現在其它動物的纖維肉瘤